頂空氣(qi)相色譜(pu)系列講座(17)
人體血液中(zhong)一氧化碳的分(fen)(fen)析(xi)——定量分(fen)(fen)析(xi)4
二、氯化鈀法
原(yuan)理——碳氧(yang)血紅蛋白與(yu)酸作用(yong)(yong),釋放(fang)出CO氣體,它能定(ding)量地與(yu)氯(lv)化鈀(ba)作用(yong)(yong)。然后用(yong)(yong)紫外(wai)分光光度法測定(ding)反應(ying)后氯(lv)化鈀(ba)溶(rong)液的濃(nong)度,從剩余氯(lv)化鈀(ba)的量可求碳氧(yang)血紅蛋白的飽(bao)和率。
操(cao)作——1. 取擴散吸收池一(yi)個(ge),在內(nei)槽(cao)中加入(ru) 3.0mL C(PdCl2 = 0.0025)mol/L溶液,在外槽(cao)一(yi)側加1.0mL C(H2SO4=1.8)mol/L溶液
2. 取(qu)檢材(cai)血(xue)0.5mL置(zhi)外槽另一(yi)側,立即蓋(gai)(gai)嚴蓋(gai)(gai)子,輕輕旋(xuan)轉傾(qing)斜使硫酸與血(xue)混(hun)合(he),如室(shi)溫<5℃需水浴上稍(shao)加熱,放置(zhi)1~2小時
3. 取出內槽(cao)中(zhong)(zhong)的(de)氯(lv)化(hua)鈀溶液,過(guo)濾,濾液轉入50mL容量瓶中(zhong)(zhong),用(yong)0.1mol/L鹽(yan)酸(suan)洗(xi)滌內槽(cao)三次,洗(xi)液濾入容量瓶中(zhong)(zhong),然(ran)后用(yong)0.1mol/L鹽(yan)酸(suan)稀(xi)釋至刻度,混勻后放置待測。
4. 取容量瓶中的清液置石英杯中,以(yi)0.1mol/L鹽酸作參比, 278nm處測紫外(wai)吸收。
5. 分(fen)別(bie)吸(xi)取0.5、1.0、1.5、2.0、2.5和(he)3.0mL( PdCl2 =0.025)mol/L溶液置(zhi)50mL容量瓶中,用用0.1mol/L鹽酸稀(xi)釋至刻度,同(tong)上平行操作分(fen)別(bie)測紫外吸(xi)收,得到氯化鈀(ba)的標準(zhun)曲線(xian)。
計(ji)算——將檢血的(de)氯化鈀(ba)吸(xi)收值與標準氯化鈀(ba)溶液(ye)的(de)吸(xi)收值作比較,求出剩余氯化鈀(ba)容(rong)量,再求出相應的(de)CO容(rong)量(見相關值表(biao)),然后(hou)根據檢材血的(de)血紅(hong)(hong)蛋白(bai)含(han)量計(ji)算碳(tan)氧血紅(hong)(hong)蛋白(bai)飽和(he)率。
氯化鈀與一氧(yang)化碳相關(guan)值表
剩余 PdCl2(ml/50ml) CO(ml/100ml)
碳氧血(xue)紅蛋(dan)白計算公式如下:
HbCO% = CO容量(ml/100ml)×100 ÷ 血紅(hong)蛋白(g/100ml)×1.35
注意——1. 此法(fa)對新鮮(xian)檢材血(xue)可不考慮干擾問題,如是腐敗檢材血(xue),可用醋(cu)酸鉛-醋(cu)酸
溶(rong)(rong)液代替1.8mol/L硫酸溶(rong)(rong)液,以(yi)除去(qu)硫化(hua)物的干擾。
2. 醋(cu)酸鉛(qian)-醋(cu)酸溶液配制,取10mL冰醋(cu)酸用水稀(xi)釋至(zhi)100mL ,加醋(cu)酸鉛(qian)至(zhi)飽
和。
3. 為保證檢材血和標準系列血中的(de)血紅蛋白的(de)濃度一(yi)致(zhi),平均校(xiao)正因子(zi)為
1.35